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      中國儀器網 中國儀器網 分子雜交儀

      分子雜交儀

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      分子雜交儀又稱分子雜交爐、分子雜交箱,是采用核酸分子雜交技術檢測待測基因組中是否含有已知基因序列的設備。其可替代塑料雜交袋和水浴搖床,從而避免雜交袋破損帶來的污染危險,具有微機控溫精確,爐內空氣循環裝置設計獨特,升溫速度快等特點。廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的檢測和遺傳病的基因診斷等方面。

      分子雜交儀
      分子雜交儀結構和分類

      分子雜交儀結構和分類

      分子雜交儀,又被叫做分子雜交箱或者分子雜交爐,是通過核酸分子雜交技術對是否有已知基因序列存在于待測基因組中進行檢測的設備。其在遺傳病的基因診斷、基因組中特定基因...[查看全部]

      DNA分子雜交技術介紹和類比分析

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      DNA分子具有互補堿基序列,能夠通過堿基對使氫鍵等形成,從而使穩定的雙鏈區形成為DNA分子雜交的基礎。


      雜交技術介紹

      雜交是指互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對使穩定的雜合雙鏈分子DNA分子形成的過程。雜交過程特異性非常的高,能夠采用所使用的探針已知序列檢測特異性的靶序列。待檢測的核酸和所使用探針為雜交的雙方,該檢測對象既能夠為細胞總DNA或總RNA,也能夠為克隆化的基因組DNA。按照使用方法,待檢測的核酸既能夠在細胞內雜交也能夠是提純的。探針必須經過標記,為檢測與示蹤提供便利,同位素為最常用的探針標記物,然而因為同位素可能發生泄漏,因此,這些年來,有許多非同位素標記探針的方法被發展出來。


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      核酸分子雜交的特異性和靈敏度均非常的高,所以其在遺傳病的基因診斷、基因組中特定基因序列的檢測、酶切圖譜的制作和克隆基因的篩選等方面得到廣泛地應用。其不但廣泛應用于分子生物學領域,其在在臨床診斷上的應用也越來越廣泛。


      類比分析

      為了方便理解,打個比方,將宿主DNA(一般做克隆是有很多宿主DNA)看成很多還沒裝鎖的“門”,將插入宿主DNA上(或替換掉一段序列)的目的基因看成一把特定的“鎖”,而能開那把鎖唯一的“鑰匙”就是這個基因探針。若某個“門”能夠使用“鑰匙”將其打開,則表示這個“門”已經有“鎖”了。也就是若雜交信號可以被檢測到,則表示在宿主DNA上已經存在目的基因。


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      分子雜交儀的原理和特點

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      分子雜交儀又被叫做分子雜交箱或者分子雜交爐。由于實驗的需求不一樣,因此有不同規格型號的分子雜交儀可供選擇。它是現代實驗室采用雜交技術的理想設備,能夠將塑料雜交袋和水浴搖床替代掉,從而使雜交袋破損帶來的污染危險得以避免。雜交爐的特點分別為較快的升溫速度,獨特的爐內空氣循環裝置設計以及精確的微機控溫。


      原理

      按照堿基互補配對原則,使用標記的已知DNA或RNA片段(探針)在一定條件下對樣本中是否有待測的核酸序列進行檢測的技術,即為核酸分子雜交技術。


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      在生理條件下,DNA呈現穩定的雙鏈螺旋結構。在體外,當存在如溫度超過65℃、含胺或極端pH等變性因素時,DNA分子內部的氫鍵斷裂,解離成兩條單鏈DNA,這種現象叫做變性。在將變性因素消除以后,單鏈DNA通過堿基互補使穩定的雙鏈螺旋結構重新結合成,該過程叫做復性或退火。


      在復性過程中,如果有和樣本核酸某部分序列高度同源或相同的寡核苷酸(一般為17~45個堿基)或外源性單鏈DNA片段,那么兩者能夠通過互補堿基使雜交體形成,也就是雙鏈DNA分子,該過程叫做雜交。在復性的DNA中加入一段已知的DNA片段,如果有雙鏈分子結合成,那么表明有已知的DNA序列存在于樣本中。


      核酸分子雜交不但能夠在DNA與DNA之間發生,還能夠在在RNA與RNA或者RNA與DNA之間發生,分別生成DNA-DNA、 RNA-RNA或 RNA-DNA的雙鏈結構的雜交體。


      特點

      1.分子雜交是現代實驗室采用雜交技術的理想設備,能夠將塑料雜交袋和水浴搖床替代掉,從而使雜交袋破損帶來的污染危險得以避免。


      2.雜交爐的特點分別為較快的升溫速度,獨特的爐內空氣循環裝置設計以及精確的微機控溫。


      3.溫度控制采用數字PID技術,輸岀采用PWM方式,具有穩定的性能,能夠精確的控溫,并且設有超溫保護裝置。


      4.能夠將酶標板或試劑托盤的擺動速度、滾動式瓶架旋轉速度和箱內控溫溫度同時顯示出來。


      5.能夠 在設定范圍

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      分子雜交儀結構和分類

      推薦訪問:

      分子雜交儀,又被叫做分子雜交箱或者分子雜交爐,是通過核酸分子雜交技術對是否有已知基因序列存在于待測基因組中進行檢測的設備。其在遺傳病的基因診斷、基因組中特定基因序列的檢測、酶切圖譜的制作和克隆基因的篩選等方面得到廣泛地應用。


      結構

      電腦控制系統、隔膜、雜交管、搖床、離心管轉架或雜交瓶轉架以及箱體共同構成分子雜交儀,由于分子雜交儀的型號差異,其箱體所容納的平板數、載玻片數微孔版數、管子數也不一樣。


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      分類

      根據自動化程度,分子雜交儀包括全自動分子雜交儀、半自動分子雜交儀和普通分子雜交儀。

      1.全自動分子雜交儀

      目前,全自動分子雜交儀在基因芯片產品方面被使用,其能夠使雜交過程不需要人工參與,使整個雜交過程的自動化得以實現。在特定溫度條件下,基因組DNA與芯片上特異的DNA探針發生反應,然后進行雜交、洗膜、孵育、顯色等,從而使檢測結果獲得,全自動分子雜交儀自動完成上述所有過程。


      2.半自動分子雜交儀

      半自動分子雜交儀不但可以控制雜交過程中的各種參數,而且還可以在人工參與下完成雜交后的如孵育、顯色等其他實驗步驟。


      3.普通分子雜交儀

      普通分子雜交儀結構通常為封閉式恒溫箱式,此外加上振蕩或旋轉式可動機構,溫度控制、轉速等實驗參數的控制和調整由控制系統來實現。


      按照實驗的需求,可以將分子雜交儀以下6類:

      1. 微孔板原位雜交儀。

      2. 載玻片原位雜交和平板雜交儀。

      3.Western雜交儀。

      4.用于大容量的分子雜交儀。

      5.用于 Southern或者 Northern技術點雜交的雜交儀。

      6. 用于小容量的核酸雜交儀。

      7. 微孔板原位雜交儀。


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      分子雜交爐技術參數和特征

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      分子雜交爐是提供DNA分子雜交一種儀器設備,DNA分子具有互補堿基序列,能夠通過堿基對使氫鍵等形成,從而使穩定的雙鏈區形成為DNA分子雜交的基礎。


      在進行DNA分子雜交之前,首先必須從細胞中提取兩種生物的DNA分子,再采用加熱或提高pH的方法,使雙鏈DNA分子分離成為單鏈,這個過程叫做變性。之后,雜交兩種生物的DNA單鏈,先用同位素標記其中一種生物的DNA單鏈,若有互補的部分存在于兩種生物DNA分子之間,那么雙鏈區就能形成。因為同位素被檢出的靈敏度高,所以其可以檢測出兩種生物DNA分子之間形成百萬分之一的雙鏈區。


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      技術參數

      功率:小于600瓦特。

      電源電壓:220伏特。

      雜交瓶規格:¢35×220mm

      連續工作時間:24小時。

      溫度平衡時間:小于20分鐘。

      溫度顯示分辨率:0.1攝氏度。

      溫度均勻性誤差:±0.03攝氏度。

      控溫精度±0.5攝氏度。

      溫度范圍:室溫+5-100攝氏度。

      旋轉速度:產品型號不同,旋轉速度也存在差異。


      特征

      儀器結構采用模塊化設計,具有新穎的外觀,穩定的溫度控制,簡單可靠的操作,穩定的轉速,外界的電源電壓不對其產生影響。在連續旋轉的雜交瓶內進行雜交的過程。膜與探針混合完全,使放射同位素的泄漏和雜交袋的繁瑣封裝得以徹底的避免。該儀器工作室具有防輻射功能,六只雜交管能夠一次裝上。


      ...

      分子雜交儀操作規程和注意事項

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      分子雜交儀,又被叫做分子雜交箱或者分子雜交爐,其在遺傳病的基因診斷、基因組中特定基因序列的檢測、酶切圖譜的制作和克隆基因的篩選等方面得到廣泛地應用。其不但廣泛應用于分子生物學領域,其在在臨床診斷上的應用也越來越廣泛。


      操作規程

      通電預熱

      將電源接通和開關打開,恒溫室溫度顯示應當顯示室溫值,按下溫度預熱,預熱20min之后,恒溫室在恒溫狀態。


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      雜交管安裝

      旋轉門鎖,將玻璃門打開,向下點動旋轉、步進開關、將雜交支架旋轉到合適的位置,在旋轉支架卡緊雜交管,將玻璃門關閉和鎖緊。


      啟動旋轉支架

      向上接通旋轉、步進開關、轉動雜交支架,開始雜交反應。


      反應完成

      完成雜交反應之后,關斷旋轉、步進開關、旋轉門鎖,使玻璃門打開,將雜交管取出,如果此時,雜交管處于不合適的位置,可向下點動旋轉、步進開關、將旋轉支架調整到合適的位置,方便將雜交管取出。


      將電源開關關閉


      注意事項

      1.在進行同位素標記的雜交實驗時,必須對雜交管的密封情況進行檢查,防止引起污染。如果發生污染,需要將情況及時匯報給有關部門的使用人員和檢修人員,使不必要的傷害盡可能的減少。


      2.因為分子雜交儀具有緊湊的結構和較高的密封性要求高,因此,當儀器運行中有故障出現,應當將電源切斷,及時告知專業技術人員。


      3.電源插座的接觸良好。


      4.當接觸在高溫狀態時,對雜交管進行裝取,留心,不要燙傷。


      5.在裝入反應液前,需要保持雜交管清潔,在將反應液和反應膜裝入后,必須將瓶蓋擰緊,防止漏液。


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