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      蛋白質純化的原則

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      蛋白質純化系統用于蛋白質的分離純化,蛋白質的分離純化在生物化學研究應用中使用廣泛,是一項重要的操作技術。 一個典型的真核細胞可以包含數以千計的不同蛋白質,一些含量十分豐富,一些僅含有幾個拷貝。為了研究某一個蛋白質,必須首先將該蛋白質從其他蛋白質和非蛋白質分子中純化出來。


      原則

      蛋白純化對不同蛋白間內在的相似性與差異進行利用,對各種蛋白間的相似性進行利用來將非蛋白物質的污染去除并且而利用各蛋白質的差異從其他蛋白中純化出目的蛋白。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學活性均會存在差異,利用這些差異能夠從如大腸桿菌裂解物等混合物中將蛋白提取出來,從而使重組蛋白得到。


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      粗分離和精細純化階段為蛋白的純化主要的兩個階段。通常采用樹脂法來進行蛋白的純化。

      粗分離階段主要分開目的蛋白和如DNA、RNA等其他細胞成分,因為,這個時候,樣板具有比較大的體積,比較雜的成分,因而所用的樹脂應當滿足寬粒徑分布,大顆粒,流速高,以及容量高的特點,并且能夠迅速分開蛋白與污染物,如有必要,可以將如蛋白酶抑制劑的相應的保護劑加入,避免降解目的蛋白。

      精細純化階段則則需要達到更高的分辨率要求,這個階段需要區分開目的蛋白與那些分子量大小及理化性質接近的蛋白,為了使分辨率提高,需要使用更加小的樹脂顆粒。離子交換柱和疏水柱經常被使用,樹脂的選擇性和柱效兩個因素在應用的時候需要綜合考慮。


      蛋白質純化

      蛋白質的的物理、化學、生物化學、物理化學和生物學性質取決于它的一級、二級、三級和四級結構,不同蛋白質之間的性質存在差異或者改變條件是使之具有差異,利用一種同時多種性質差異,在兼顧收率和純度的情況下,選擇蛋白質提純的方法。

      蛋白質通常通常均是由復雜的混合物形式存在于組織或細胞中,有成千種不同的蛋白質存在于每種類型的細胞內。分離和提純蛋白質非常的艱巨而繁重。直到現在還不能夠從復雜的混合物中使用一個單獨的或一套現成的方法提取出任何一種蛋白質。然而,對于任何一種蛋白質,選擇一套適當的分離提純程序來獲取高純度的制品是非常有可能的。

      蛋白質提純的總目標是使制品純度或比活性得到增加,從細胞的全部其他成分特別是不想要的雜蛋白中以合理的效率、速度、收率和純度分離出蛋白質,為其對純化的要求。同時這種多肽的生物學活性和化學完整性依然得以保留。


      2019-08-02 17:11:47 瀏覽次數:93次
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